如何生成更可靠的免疫ELISA表型數(shù)據(jù)

ELISA數(shù)據(jù)中雖然 表面 CD分子仍是用于免疫表型的常用的標(biāo)記 ，但常規(guī)平行檢測 的CD分子卻有所增加。研究者把其它細(xì)胞表面 的蛋白和細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記 物加入到免疫表型分析 中，已經(jīng)成為標(biāo)準(zhǔn)做法 。因?yàn)檫@些進(jìn)展不可避免地使得 研究設(shè)計(jì)更加具有挑戰(zhàn)性，我們咨詢了一組專家來幫助您生成更可靠的免疫表型數(shù)據(jù) 。

研究免疫表型 時(shí)，其復(fù)雜性是不同 的。

從基礎(chǔ)研究到臨床監(jiān)測 ，研究者 對(duì)這些 細(xì)胞 進(jìn)行 免疫 表型 分析 ，有很多原因 。 Sartorius細(xì)胞 分析測試 開發(fā) 經(jīng)理 MarkCarter指出 ，免疫表型研究的范圍 從識(shí)別單一表型到復(fù)雜的多參數(shù)應(yīng)用 ，比如 識(shí)別 從HIV 患者的血液樣本中提取 CD4+T細(xì)胞 。 他說 ：“在試劑 、儀器 和軟件 方面 的進(jìn)步 使得 免疫 表型 研究 更為 復(fù)雜 。" 例如 ，現(xiàn)在可以對(duì)分化 細(xì)胞進(jìn)行質(zhì)量控制 ；描述 癌癥 及其 治療 反應(yīng) ；研究 疾病 對(duì)病人 免疫系統(tǒng) 的影響 ；或者 為器官捐贈(zèng)的捐獻(xiàn)者 和接受者進(jìn)行 免疫 配對(duì) 。

用到 的標(biāo)記 的數(shù)量和類型決定了免疫 表型 的目的 。 CellSignalingTechnology高級(jí) 開發(fā) 科學(xué)家 SarahKlein博士指出 ：“流式細(xì)胞術(shù)免疫 表型分析的閱讀次數(shù)少為兩次 ，因?yàn)槟?總是 想將細(xì)胞 活性 的標(biāo)記 與你選擇 的標(biāo)記結(jié)合起來 .“有些 實(shí)驗(yàn)室在有特殊問題 要問時(shí)會(huì) 做3-5個(gè)標(biāo)記 免疫表型分析 ，而另一些 實(shí)驗(yàn)室 通常 在多個(gè) 平臺(tái) 上使用 10 -15 個(gè)標(biāo)簽組合 。 大數(shù)量的標(biāo)記只是生物信息學(xué) 平臺(tái) 的局限性 ，包括檢測技術(shù) 、可獲得 的抗體 和分析 大型 面板 提供 的大量數(shù)據(jù) 。

Bio -Rad流式細(xì)胞 學(xué)現(xiàn)場 營銷專家 MikeBlundell對(duì)此 表示 贊同 ，并指出 ，盡管可以單獨(dú)使用一種標(biāo)記 來識(shí)別特定類型 的細(xì)胞 (如T細(xì)胞 CD3或B細(xì)胞 CD19)，但是 確定 血液 中的一個(gè)普通譜系可能需要四個(gè)標(biāo)記 ，并確定特定的譜系組合 ，就可以把這一 數(shù)字 增加 到八個(gè) 。 他說：“監(jiān)控 激活狀態(tài) 、記憶 狀態(tài) 和多個(gè) 子集 的譜系 通常 需要 超過20個(gè)標(biāo)記 。 比如，即使 只看T細(xì)胞亞群，你通常也想要確定樣品中其他類型的細(xì)胞 ，以確保他們不會(huì)受到影響 ，或者從你的分析中去除這些細(xì)胞 。

在面板中可以包含的標(biāo)簽 越多，需要用到的樣本 就越少 ，"MichelleM.Poulin博士解釋道。Fluidigm質(zhì)譜流式細(xì)胞術(shù)領(lǐng)域應(yīng)用的高級(jí)經(jīng)理。研究者們用質(zhì)譜流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)來進(jìn)行免疫表型分析，通常會(huì)將超過30到40個(gè)標(biāo)記結(jié)合在一起 。