RNA提取-注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)專門辟出RNA操作區(qū)，離心機(jī)，移液器，試劑等均應(yīng)。RNA操作區(qū)應(yīng)保持清潔，并定期進(jìn)行除菌。

2.在超凈臺中按照細(xì)胞培養(yǎng)的要求進(jìn)行操作，可以有效避免操作中引起的RNA酶污染。

3.操作過程中應(yīng)始終戴一次性橡膠手套，并經(jīng)常更換，以防止手、臂上的細(xì)菌和真菌以及人體自身分泌的RNA酶帶到試管或污染用具，盡避免使用一次性塑料手套。塑料手套不但常常造成操作不便，且塑料手套的多出部分常常在器具的RNase污染處和RNase-free處傳遞RNase，擴(kuò)大污染。

4.避免在操作中說話聊天。也可以戴口罩以防止引起RNA酶污染。

5.盡量使用一次性的塑料制品，盡量避免共用器具如濾紙，離心管，槍頭等，以防交叉污染。例如，從事RNA探針工作的研究者經(jīng)常使用RNase H，T1等，在操作過程中極有可能造成移液器、離心機(jī)等的污染。而這些污染了的器具是RNA操作的大敵。

6.關(guān)于一次性塑料制品，建議使用廠家供應(yīng)的出廠前已經(jīng)滅菌的槍頭和離心管等。多數(shù)廠家供應(yīng)的無菌塑料制品很少有RNA酶污染，買來后可直接用于RNA操作。許多研究者用DEPC等處理的塑料制品，往往由于二次污染而帶有RNA酶，從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

7.配制溶液用的酒精、異丙醇、Tris等應(yīng)采用未開封的新瓶。

8.所有舊塑料制品都必須用0.5M的NaOH處理10分鐘，用雙蒸水*沖洗，DEPC-H20浸泡過夜后滅菌。

9.無法用DEPC處理的用具可用氯仿擦拭若干次，這樣通常可以消除RNA酶的活性。但氯仿會溶解某些塑料制品，應(yīng)當(dāng)注意。

10.如果需要遠(yuǎn)距離運(yùn)輸或長期儲藏RNA樣品，建議先將標(biāo)本（細(xì)胞、組織）保存在RNA保存液中。