研域(上海)生物幫您整理ELISA實驗操作要點樣本的技巧

研域生物幫您收集整理三類樣本的技巧: 由于ELISA實驗只能檢測可溶性蛋白質(zhì)的含量，因此要求樣本應(yīng)清晰透明并離心除去沉淀物或懸浮物質(zhì)。為確保實驗的準(zhǔn)確性， -20℃或-80℃保存的樣本應(yīng)在1-6個月內(nèi)完成檢測，4℃保存的樣本在一周內(nèi)完成檢測。此外，樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3，否則會造成假陰性結(jié)果?？捎糜贓LISA實驗的樣本一般有血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及組織勻漿等。不同樣本類型的預(yù)處理方法也不同。適當(dāng)?shù)臉颖绢A(yù)處理是確保ELISA實驗正確性和準(zhǔn)確性的第一步。這里，我們將介紹幾種不同樣本類型的處理方法。

血清

血清是ELISA實驗的樣本，其預(yù)處理也十分簡單。使用無熱原無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本，將試管或離心管在室內(nèi)溫度下放置自然凝固（視室溫環(huán)境10分鐘到2小時不等）或4℃過夜，分離出血清，（建議傾斜試管或離心管以擴(kuò)大液面的橫截面，使血清能更大程度的分離出來，），2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘），仔細(xì)收集上清，立即進(jìn)行測定，建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復(fù)凍融，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

注意事項：

在收集血液樣本的過程中應(yīng)避免溶血，因為紅細(xì)胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，這種情況下，ELISA實驗中將會出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng)，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。另外，樣本還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因為細(xì)菌可能含有內(nèi)源性HRP，也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。

血漿

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、肝素鈉、枸櫞酸納或檸檬酸鈉作為抗凝劑，使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本，采集后30分鐘內(nèi)，混合10-20分鐘后，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘），仔細(xì)收集上清液（血漿），建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復(fù)凍融。樣本應(yīng)避免溶血或高血脂。保存過程中如有沉淀形成，使用前應(yīng)該再次離心。

注意事項：

檢測前請仔細(xì)閱讀ELISA試劑盒說明書，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。

尿液

用無菌管收集，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

細(xì)胞培養(yǎng)上清

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。將細(xì)胞培養(yǎng)上清液吸入離心管中并以2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘），除去細(xì)胞碎片和雜質(zhì)，收集上清液備用，樣本保存在-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融，保存過程中如有沉淀形成，使用前應(yīng)再次離心。

腦脊液

用無菌管收集，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，使用前應(yīng)再次離心。（采集大鼠腦脊液）的方法：采集腦脊液時，用濕紗布擦試大鼠頸背部皮膚，剪去背毛暴露皮膚。兩耳連線剪一橫切口(1. 5cm左右)，在其中點向尾側(cè)沿皮下剪開2cm，將皮分離兩側(cè)，擴(kuò)大視野。緊貼大鼠頭骨依次逐層剪切各肌層，并斷端依次拉向尾側(cè)擴(kuò)大視野。注意，有出血時用干紗布按壓止血，保持術(shù)口清晰。接近頸后黃韌帶時，小心地用7號注射針頭分離覆蓋的肌肉，暴露寰枕膜。用1ml注射器(針頭用止血鉗使針尖與針體成150度鈍角)，針斜面向上，近水平刺入蛛網(wǎng)膜下腔，固定針體，緩慢抽取腦脊液，一般采集量為100-200微升。)

唾液

用無菌管收集，2-8℃條件離心5分鐘左右（5000-6000轉(zhuǎn)/分鐘），仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，使用前應(yīng)再次離心。

以上是研域(上海)生物幫您整理ELISA實驗操作要點樣本的技巧，希望可以幫助到大家！