ELISA試劑盒競爭抑制法操作問題

ELISA試劑盒方法做兩對半，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體夾心法檢測，而HBcAb、HBeAb使用競爭抑制法檢測。而競爭抑制法的原理：酶標(biāo)抗體與樣本抗體在同樣的體系中，與固相抗原競爭結(jié)合是等比關(guān)系。理論上講，應(yīng)該先將樣本與酶標(biāo)抗體先行混勻，然后加入反應(yīng)也進(jìn)行。但實(shí)際工作中并非如此，都是分開加入反應(yīng)孔。這樣會造成先加入的先結(jié)合，與后加入者并不是公平的關(guān)系，因而也不符合等比原則。特別是在放置時(shí)間長，且溫度高的情況下，對結(jié)果有很大的影響。

第二軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院對此造成的影響進(jìn)行了研究。將94份陰性標(biāo)本用生理鹽水進(jìn)行1：30稀釋，在加入標(biāo)本后按下表時(shí)間放置后將陰性標(biāo)本94份并用生理鹽水進(jìn)行1：30稀釋，在加入標(biāo)本后按下表時(shí)間放置后再加入酶標(biāo)抗體，然后檢測結(jié)果如下： 

    從上表可以看出，如果同時(shí)加入標(biāo)本與酶標(biāo)抗體，沒出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。2分鐘后再加入酶標(biāo)抗體，由于標(biāo)本比酶標(biāo)抗體先結(jié) 合了兩分鐘，因此出現(xiàn)了7.4%的假陽性。30分鐘后再加，假陽性高達(dá)57.4%。因此建議競爭抑制法的項(xiàng)目，加十個樣本后立即加酶標(biāo)抗體，這樣對檢測結(jié)果沒有影響。